菌落總數(shù)的測定方法

迅數(shù)科技

　　菌落總數(shù)的測定方法主要包括以下步驟：
　　1、樣品處理和稀釋
　　無菌操作：取檢樣25g（或25ml），放于225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨制成1:10的均勻稀釋液。
　　固體檢樣：在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~10000r/min的速度處理1min，制成1:10的均勻稀釋液。
　　稀釋液制備：用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻，制成1:100的稀釋液。
　　遞增稀釋：另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。
　　2、傾注培養(yǎng)
　　選擇稀釋度：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇2~3個適宜稀釋度，分別在制10倍遞增稀釋的同時，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。
　　傾注培養(yǎng)基：將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動平皿，混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。
　　3、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
　　培養(yǎng)條件：待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h，取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。
　　計(jì)數(shù)方法：菌落計(jì)數(shù)時，從低稀釋度的平板開始計(jì)數(shù)。若所有平板上的菌落數(shù)均小于30CFU，則需計(jì)數(shù)所有平板上的菌落數(shù)，但僅采用最接近30CFU的兩個平板的菌落數(shù)來計(jì)算最終菌落數(shù)。
　　4、結(jié)果報告
　　報告方式：菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。
　　特殊情況：若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。
　　在進(jìn)行菌落總數(shù)測定時，需要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，以避免外部污染對結(jié)果的影響。此外，培養(yǎng)箱的條件應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行設(shè)置和控制，以確保培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

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